بیان ترشحی ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب هیستیدین در پیکیا پاستوریس

سابقه و هدف: بتا-گزایلوزیدازها (ec 3.2.1.37)، از مهم ترین آنزیم ها در مجموعه آنزیم های همی سلولازی با پتانسیل کاربرد بالا در صنعت از جمله تولید بیواتانول، از خانواده گلیکوزیدازها بوده که حذف متوالی بقایای بتا-گزایلوزیل را از انتهای غیر احیا کننده ی گزایلوبیوز و گزایلوالیگوساکاریدهای خطی با پیوندهای β-1,4 انجام داده و به همراه بتا-گزایلانازها، برای دپلیمریزه کردن کامل گزایلان ضروری می باشند. هدف از این تحقیق بیان ترشحی ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب هیستیدین در میزبان بیانی پیکیاپاستوریس، جهت رسیدن به افزایش سطح بیان و سپس خالص سازی نسبی آنزیم بود. مواد و روش ها: در این تحقیق توالی پروتئینی آنزیم بتا-گزایلوزیداز باکتریایی پس از بهینه سازی کدون برای میزبان بیانی pichia pastoris، و افزودن توالی 6xhis-tag با طراحی پرایمرهای مناسب، به میزبان مخمری انتقال یافت. یافته ها: نتایج به دست آمده در کشت فلاسک، تولید u/l 40 آنزیم بتا-گزایلوزیداز نوترکیب با فعالیت ویژه ی u/mg  6/0 را در محیط بیانی bmmy نشان داد.  نتیجه گیری: کلونینگ و بیان موفق ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی جهت به دست آوردن آنزیم فعال و پایدار از سیستم بیانی مخمر، با مقدار بالای بیان آنزیم انجام شد